Plásmido Doble Nickase (h) Biglycan: sc-401408-NIC

BGN codifica biglicano, un proteoglicano pequeño rico en leucina de la matriz extracelular que regula la fibrilogénesis del colágeno, la organización de la matriz y la biomecánica tisular. Biglicano se une a factores de crecimiento y a receptores de la superficie celular, influyendo en vías de señalización como TGF-β, Wnt/β-catenina y respuestas inflamatorias mediadas por receptores tipo toll, que determinan la adhesión, la migración y la diferenciación celulares. La alteración de la expresión de BGN y la remodelación de proteoglicanos se asocian con fibrosis, remodelado vascular y cardíaco, degeneración osteoarticular e interacciones tumor–estroma, lo que convierte a BGN en un nodo útil para estudiar la señalización celular impulsada por la MEC y la mecanobiología. En sistemas humanos, BGN se utiliza con frecuencia como marcador y mediador funcional de la activación estromal y de señales inflamatorias asociadas a la matriz.

Biglycan El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BGN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BGN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BGN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BGN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.