Plásmido CRISPR de Activación (h) Bex1: sc-404292-ACT

BEX1 (brain expressed X-linked 1) codifica la proteína Bex1, un factor tipo adaptador intrínsecamente desordenado, enriquecido en tejidos neuronales, que modula programas transcripcionales y la transducción de señales vinculadas a la diferenciación neuronal, la supervivencia y las respuestas al estrés. Se ha implicado a Bex1 en la regulación de la progresión del ciclo celular y la apoptosis mediante interacciones con vías como la señalización de neurotrofinas y procesos asociados a MAPK/ERK, con efectos dependientes del contexto sobre la proliferación y la diferenciación. Se han descrito alteraciones en la expresión de BEX1 en múltiples tipos de tumores y en estudios de biología del neurodesarrollo y la neurodegeneración, lo que respalda su uso como marcador y como nodo mecanístico en investigaciones sobre especificación de linaje y plasticidad celular. Estas propiedades hacen que BEX1 sea relevante para desentrañar redes de regulación génica que acoplan el estado de diferenciación al control del crecimiento.

Bex1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BEX1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bex1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BEX1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BEX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bex1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BEX1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bex1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bex1 en células tumorales con expresión de BEX1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.