Partículas Lentivirales de Activación (h) BCoR: sc-409976-LAC

BCOR codifica el correpresor de BCL6 (BCoR), un corre­gulador nuclear de la transcripción que se asocia con BCL6 y otros factores de unión al ADN para modular programas de expresión génica que controlan la diferenciación, la progresión del ciclo celular y la especificación de linaje. BCoR participa en la represión epigenética mediante complejos multiproteicos vinculados a la remodelación de la cromatina y a la modificación de histonas, incluidas vías asociadas a Polycomb, configurando así estados transcripcionales del desarrollo y de la hematopoyesis. La desregulación de la función de BCOR se ha relacionado con redes alteradas de represión transcripcional en biología del cáncer y en trastornos congénitos del desarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar la regulación génica dependiente del contexto. En células humanas, la actividad de BCOR se investiga habitualmente en el marco de programas impulsados por factores de transcripción, la ocupación de la cromatina y las relaciones entre epigenoma y fenotipo.

Las partículas de activación lentiviral BCoR (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BCOR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BCoR (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BCOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BCoR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BCOR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.