Bcl-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400025-ACT

BCL2は、ミトコンドリア外膜に存在する膜内在性タンパク質Bcl-2をコードしており、ミトコンドリア外膜透過化（MOMP）を抑制してシトクロムcの放出を制限することで、アポトーシスを抑えます。Bcl-2は、アポトーシス促進性のBH3-onlyタンパク質を隔離し、BAX/BAKの活性化に拮抗することで、内因性アポトーシス経路の重要な結節点として機能し、ストレス、増殖因子の枯渇、DNA損傷に対する細胞応答を規定します。BCL2の活性はPI3K–AKTやMAPK経路を含む生存シグナル伝達ネットワークと交差し、ミトコンドリア動態やレドックス恒常性にも影響を及ぼします。BCL2発現の異常は、がんにおけるアポトーシス開始準備（apoptotic priming）の低下としばしば関連し、腫瘍細胞および免疫細胞集団の異常な生存に寄与するため、発がん、治療応答、免疫恒常性の研究に広く関係します。

Bcl-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性BCL2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Bcl-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における BCL2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はBCL2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Bcl-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のBCL2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるBcl-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびBCL2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるBcl-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。