Plásmido CRISPR de Activación (h) Bcl-11a: sc-403612-ACT

BCL11A codifica el factor de transcripción Bcl-11a, una proteína de unión al ADN con dedos de zinc que regula la especificación de linaje y los programas de diferenciación, en particular dentro de los compartimentos hematopoyético e inmunitario. Participa en el control transcripcional asociado a la cromatina, integrándose con complejos correpresores y coactivadores para configurar redes de expresión génica implicadas en decisiones de destino celular, proliferación y temporización del desarrollo. BCL11A está estrechamente vinculado a la regulación de la globina eritroide y a un control epigenético más amplio de la maduración hematopoyética, lo que lo convierte en un nodo clave en las vías que gobiernan el cambio de hemoglobina y el desarrollo linfoide. La actividad desregulada de BCL11A se ha asociado con la biología de enfermedades hematológicas y con estados de diferenciación alterados, lo que respalda su uso como diana mecanística en estudios de genómica funcional.

Bcl-11a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCL11A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bcl-11a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCL11A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCL11A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bcl-11a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCL11A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bcl-11a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bcl-11a en células tumorales con expresión de BCL11A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.