BChE Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401834-ACT

Il gene umano **BCHE** codifica la butirrilcolinesterasi (BChE), un’idrolasi serinica secreta, abbondante nel plasma, che idrolizza gli esteri della colina e contribuisce alla regolazione della segnalazione colinergica metabolizzando l’acetilcolina quando l’acetilcolinesterasi è limitata. La BChE partecipa anche al metabolismo di xenobiotici e di farmaci esterei e può influenzare processi infiammatori e metabolici modulando la disponibilità di neurotrasmettitori e vie associate ai lipidi. La variabilità genetica o un’espressione alterata di **BCHE** sono state associate a differenze nella sensibilità agli agenti bloccanti neuromuscolari e all’esposizione agli organofosfati, e sono state studiate nel contesto della neurodegenerazione e di fenotipi metabolici. Queste caratteristiche rendono **BCHE** un bersaglio utile per studiare la biologia delle colinesterasi, i meccanismi di detossificazione e la regolazione sistemica degli enzimi.

BChE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCHE senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BChE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCHE nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCHE, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BChE. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCHE nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BChE nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BChE nelle cellule tumorali con espressione di BCHE silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.