Plásmido Doble Nickase (h) BBS4: sc-403421-NIC

BBS4 codifica un componente central del BBSoma, un complejo multiproteico que media el tráfico de proteínas de membrana ciliar y favorece el ensamblaje y el mantenimiento del cilio primario. Mediante su coordinación con la maquinaria de transporte intraflagelar, BBS4 contribuye a vías de señalización dependientes de los cilios, como Hedgehog y otras cascadas mediadas por receptores, que determinan la polaridad celular, la transducción sensorial y los patrones del desarrollo. La alteración de la función de BBS4 perturba la ciliogénesis y modifica la dinámica de la señalización ciliar, lo que vincula este gen con el síndrome de Bardet–Biedl y con fenotipos más amplios relacionados con ciliopatías. En consecuencia, BBS4 se estudia ampliamente en el contexto de la biología del centrosoma/cuerpo basal, el transporte vesicular y los procesos metabólicos y del neurodesarrollo regulados por los cilios.

BBS4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BBS4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BBS4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BBS4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BBS4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.