Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
BBS4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403421
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- BBS4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico BBS4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BBS4 Anticuerpo (1292CT845.130.218): sc-517315
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
BBS4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403421 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
BBS4 codifica un componente central del complejo BBSome, que coopera con la maquinaria de transporte intraflagelar para regular el ensamblaje del cilio primario y el tráfico de proteínas de membrana ciliar. A través de su función en la competencia de señalización ciliar, BBS4 influye en vías como Hedgehog y otros programas mediados por receptores que dependen de una ciliogénesis intacta y de una entrega selectiva de carga. La alteración de BBS4 perturba la función del centrosoma/cuerpo basal, compromete la estructura ciliar y modifica las respuestas celulares a señales extracelulares. Las variantes en BBS4 se asocian con el síndrome de Bardet–Biedl y otras ciliopatías relacionadas, lo que lo hace relevante para estudiar los mecanismos que vinculan la disfunción ciliar con fenotipos del desarrollo y metabólicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO BBS4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BBS4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BBS4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BBS4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BBS4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BBS4 para la investigación de la señalización de BBS4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de BBS4 críticos para la función de BBS4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BBS4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido BBS4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BBS4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BBS4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BBS4 (h) y el plásmido HDR BBS4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BBS4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BBS4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.