Plásmido Doble Nickase (h) BBS1: sc-410535-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BBS1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BBS1 (h) y el plásmido de doble nickasa BBS1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BBS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BBS1 Anticuerpo (F-1): sc-365138
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BBS1 | sc-410535-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BBS1 | sc-410535-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BBS1 codifica una subunidad central del BBSoma, un complejo multiproteico que coopera con la maquinaria IFT para regular el tráfico de proteínas de membrana ciliar y la competencia de señalización de los cilios primarios. Al controlar la localización y el recambio de receptores, BBS1 influye en vías dependientes de los cilios, incluidas la señalización Hedgehog y la mediada por GPCR, con efectos posteriores sobre la homeostasis celular, la regulación neuroendocrina y el desarrollo. La alteración de BBS1 perjudica la ciliogénesis y la clasificación de cargas, lo que conduce a una transducción de señales modificada y a defectos en la composición ciliar. Las variantes en el BBS1 humano están fuertemente asociadas con el síndrome de Bardet–Biedl y otras ciliopatías relacionadas, lo que respalda su amplia relevancia para el estudio de mecanismos de enfermedad vinculados a los cilios.
BBS1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BBS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BBS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BBS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BBS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.