Plasmide CRISPR d'Activation (h) Barx2: sc-403458-ACT

Le gène humain **BARX2** code **Barx2**, un facteur de transcription à homéoboîte qui régule les décisions de destinée cellulaire et les programmes de différenciation au cours du développement et du remodelage tissulaire. Grâce à une liaison à l’ADN spécifique de séquence, Barx2 contribue à coordonner des réseaux transcriptionnels liés aux interactions épithélio-mésenchymateuses, à l’organisation du cytosquelette et à la régulation de la matrice extracellulaire, influençant des processus tels que la migration et la spécification des lignages. L’activité de BARX2 s’articule avec des axes de signalisation développementaux plus larges qui façonnent la morphogenèse et la plasticité cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la différenciation, de la régénération et des dérégulations du contrôle transcriptionnel. Des altérations de l’expression de BARX2 ont été rapportées dans divers contextes d’architecture tissulaire aberrante et de biologie des maladies prolifératives, ce qui étaye son intérêt comme nœud mécanistique pour l’exploration des voies transcriptionnelles.

Barx2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BARX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Barx2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BARX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BARX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Barx2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BARX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Barx2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Barx2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BARX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.