Partículas Lentivirales de Activación (h) BAP31: sc-402421-LAC

BCAP31 codifica BAP31, una chaperona integral de la membrana del retículo endoplásmico (RE) que coordina la biogénesis de proteínas de membrana, el control de calidad del RE y el tráfico vesicular entre el RE y el Golgi. BAP31 participa en el manejo y la exportación de proteínas cliente nacientes y vincula la homeostasis del RE con la señalización apoptótica mediante interacciones que influyen en la activación de caspasas y en vías mitocondriales. A través de sus funciones en proteostasis y transporte intracelular, BCAP31 se estudia con frecuencia en el contexto de respuestas celulares al estrés, señalización relacionada con el sistema inmunitario y muerte celular regulada. La desregulación de procesos de plegamiento y tráfico asociados al RE en los que participa BAP31 se ha asociado con estados fisiopatológicos en los que intervienen el estrés proteotóxico y una apoptosis aberrante.

Las partículas de activación lentiviral BAP31 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de BCAP31 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral BAP31 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción BCAP31, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de BAP31. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo BCAP31 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.