Partículas Lentivirales de Activación (h) ATR: sc-400335-LAC

ATR (relacionada con ataxia telangiectasia y Rad3) codifica una cinasa de serina/treonina similar a PI3K que actúa como sensor central del estrés replicativo y del ADN monocatenario, activando la señalización de puntos de control para preservar la estabilidad del genoma. ATR se recluta a través de ATRIP y es estimulada por TOPBP1 y ETAA1 para fosforilar sustratos clave como CHK1, coordinando la progresión de la fase S, la estabilización de la horquilla de replicación y la elección de la vía de reparación del ADN. Mediante el crosstalk con factores de recombinación homóloga y complejos de protección de la horquilla, la señalización de ATR limita las roturas de doble cadena asociadas a la replicación y controla la detención del ciclo celular bajo estrés genotóxico. La actividad desregulada de la vía de ATR se asocia con inestabilidad cromosómica y se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del cáncer, trastornos del neurodesarrollo y síndromes que implican una respuesta al daño del ADN deficiente.

Las partículas de activación lentiviral ATR (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ATR en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ATR (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ATR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ATR. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ATR y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.