Plasmide Double Nickase (h) ATR: sc-400335-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATR Double Nickase (h) et le plasmide ATR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATR. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATR Antibody (C-1): sc-515173
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATR | sc-400335-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATR | sc-400335-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATR code une protéine kinase sérine/thréonine qui agit comme régulateur maître de la réponse au stress de réplication et de la signalisation des dommages à l’ADN. Activée principalement par l’ADN simple brin recouvert de RPA au niveau des fourches de réplication bloquées, ATR phosphoryle des substrats clés tels que CHK1 afin de coordonner le contrôle du point de contrôle de la phase S, la stabilisation des fourches de réplication et la suppression de l’initiation à partir de nouvelles origines. Grâce à des interactions avec la voie ATM et la machinerie de recombinaison homologue, ATR préserve l’intégrité du génome pendant la réplication et en réponse au stress génotoxique. Une signalisation ATR dérégulée et une tolérance accrue au stress de réplication sont fréquemment impliquées dans des phénotypes d’instabilité génomique étudiés en biologie du cancer et dans des maladies héréditaires de la réparation de l’ADN.
ATR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATR.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.