Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ATP7B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419260
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ATP7B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ATP7B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATP7B Anticuerpo (A-11): sc-373964
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ATP7B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419260 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Atp7b de ratón codifica ATP7B, una ATPasa tipo P transportadora de cobre que regula la distribución intracelular de este metal al desplazarse entre la red trans-Golgi y compartimentos vesiculares en respuesta a la carga de cobre. ATP7B favorece la maduración de cuproenzimas en la vía secretora y media el secuestro y la exportación de cobre, integrándose con la homeostasis de metales celulares y las respuestas al estrés oxidativo. La alteración del manejo de cobre dependiente de ATP7B perturba el equilibrio redox, el tráfico de proteínas y la función mitocondrial, lo que convierte a Atp7b en un nodo clave para estudiar el metabolismo del cobre y la fisiopatología relacionada. En ratones, Atp7b se utiliza ampliamente para modelar fenotipos genéticos de sobrecarga de cobre e investigar mecanismos hepáticos y neurológicos vinculados a la dishomeostasis de metales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ATP7B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Atp7b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Atp7b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Atp7b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ATP7B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Atp7b para la investigación de la señalización de ATP7B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Atp7b críticos para la función de ATP7B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Atp7b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ATP7B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ATP7B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Atp7b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ATP7B (m) y el plásmido HDR ATP7B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Atp7b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Atp7b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.