Partículas Lentivirales de Activación (h) ATP6V0E1: sc-411234-LAC

ATP6V0E1 codifica la subunidad E1 del dominio V0 de la V-ATPasa, un componente central de la H\+-ATPasa vacuolar que acopla la hidrólisis de ATP al transporte de protones a través de los sistemas de endomembranas. Al acidificar endosomas, lisosomas y vesículas secretoras, ATP6V0E1 respalda la endocitosis mediada por receptores, la actividad de hidrolasas lisosomales, el recambio proteico y la autofagia, y contribuye al tráfico dependiente del pH dentro de la red Golgi–endosomal. La función de la V-ATPasa también se integra con vías de detección de nutrientes y de proteostasis, incluida la regulación de mTORC1 en la superficie lisosomal y respuestas al estrés vinculadas al equilibrio ácido-base de los orgánulos. La acidificación vesicular desregulada y las alteraciones de subunidades de la V-ATPasa se asocian con fenotipos celulares relevantes para la neurodegeneración, el metabolismo e invasión de células cancerosas y la señalización inmunitaria que depende del procesamiento endolisosomal.

Las partículas de activación lentiviral ATP6V0E1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ATP6V0E1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ATP6V0E1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ATP6V0E1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ATP6V0E1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ATP6V0E1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.