Plásmido CRISPR de Activación (h) Ataxin-2: sc-403590-ACT

ATXN2 codifica la ataxina-2, una proteína de unión a ARN que se asocia con polirribosomas y gránulos de estrés para regular la estabilidad del ARNm, la traducción y las respuestas celulares al estrés. Mediante interacciones con factores del metabolismo del ARN y con la maquinaria de control translacional, la ataxina-2 influye en la proteostasis y en programas de señalización que moldean la homeostasis neuronal y metabólica. La alteración de la función y la expresión de ATXN2 se ha implicado en fenotipos neurodegenerativos, entre ellos la ataxia espinocerebelosa tipo 2 y la modificación del riesgo genético en la esclerosis lateral amiotrófica, lo que vincula a esta proteína con vías que gobiernan la integridad sináptica y la traducción adaptativa al estrés. Como nodo que conecta el procesamiento de ARN y la biología de la respuesta al estrés, ATXN2 se estudia ampliamente en modelos de neurotoxicidad, agregación proteica y homeostasis celular.

Ataxin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ATXN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ataxin-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ATXN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ATXN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ataxin-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ATXN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ataxin-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ataxin-2 en células tumorales con expresión de ATXN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.