Plásmido CRISPR de Activación (h) ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1: sc-400429-ACT

ASGR1 codifica el receptor 1 de asialoglucoproteínas (ASGPR1), una lectina tipo C enriquecida en hepatocitos que forma un complejo receptor funcional en la membrana plasmática sinusoidal para reconocer galactosa terminal o N-acetilgalactosamina en glucoproteínas desialiladas. Este receptor media la endocitosis dependiente de clatrina y el tráfico hacia lisosomas, contribuyendo a la homeostasis de las glucoproteínas séricas y a la depuración hepática de glucoproteínas circulantes y de partículas modificadas por glicanos. La actividad de ASGPR1 vincula el reconocimiento de glicanos con el reciclaje del receptor y las vías de clasificación intracelular, integrándose con la maquinaria endocítica y los procesos metabólicos hepáticos. La alteración de la expresión o la función de ASGR1 se ha asociado con cambios en el manejo de lipoproteínas y con fenotipos cardiometabólicos, lo que lo hace relevante para estudios sobre captación específica en hígado, recambio de proteínas plasmáticas e interacciones glico-inmunes.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ASGR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ASGR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ASGR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ASGR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 en células tumorales con expresión de ASGR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.