ARID1B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-433726

Panoramica

Arid1b codifica ARID1B, una subunità del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) dipendente da ATP contenente un dominio di interazione con regioni ricche in AT, che regola il posizionamento dei nucleosomi e l’accessibilità degli enhancer. Attraverso il controllo dello stato della cromatina, ARID1B influenza programmi trascrizionali che governano la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e la differenziazione, con ruoli di rilievo nello sviluppo neurale e nell’espressione genica ristretta a specifiche linee cellulari. ARID1B partecipa alla regolazione epigenetica che si interfaccia con vie di segnalazione quali Wnt/β-catenina, Notch e il controllo del ciclo cellulare, plasmando output trascrizionali dipendenti dal contesto. L’alterazione della funzione di ARID1B è stata collegata a disturbi dello sviluppo e a fenotipi di neurosviluppo, e la composizione alterata di SWI/SNF è frequentemente studiata in modelli rilevanti per la malattia della disregolazione trascrizionale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARID1B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Arid1b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Arid1b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Arid1b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARID1B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Arid1b per lo studio della segnalazione di ARID1B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Arid1b critici per la funzione di ARID1B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Arid1b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARID1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARID1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Arid1b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARID1B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARID1B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Arid1b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Arid1b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.