ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430545

概要

マウスRarsはアルギニルtRNA合成酵素（ArgRS）をコードしており、アルギニンを対応するtRNAに結合させることで、正確な翻訳とプロテオーム恒常性を支える細胞質の中核的なアミノアシルtRNA合成酵素である。荷電tRNA^Argの供給を制御することにより、ArgRSは翻訳の忠実度、アミノ酸利用可能性に関連したストレス応答、ならびに細胞増殖や分化プログラムへの下流の影響に関与する。アミノアシルtRNA合成酵素の機能異常は、神経発達・神経筋系の表現型、免疫調節異常、増殖障害と関連づけられており、Rarsは翻訳に結び付いた摂動が細胞状態をどのように再構築するかを調べる上で重要な結節点となる。マウスモデルにおいてRarsを破綻させることは、必須遺伝子機能、代償的なtRNA合成酵素ネットワーク、そしてプロテオスタシスストレスに対する文脈依存的な感受性を直接検証する手段となる。

ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRars遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rars内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rarsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ArgRSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ArgRSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rars欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ArgRSの機能に不可欠なRarsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rarsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびArgRS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rars遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ArgRS HDRプラスミド（m）および ArgRS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRarsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRars標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。