ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409431

Übersicht

RARS kodiert die humane Arginyl‑tRNA‑Synthetase (ArgRS), eine zytosolische Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase, die Arginin an die entsprechende tRNA koppelt und damit die Genauigkeit der Translation sowie eine effiziente Proteinsynthese sicherstellt. ArgRS ist an zentralen Prozessen des RNA‑Stoffwechsels und der Translation beteiligt und kann funktionell mit Multi‑Synthetase‑Komplexen interagieren, die die Proteinbiosynthese mit zellulären Stress‑ und Signalprogrammen koordinieren. Eine Störung der Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase‑Aktivität wurde mit einem Ungleichgewicht der Proteostase und veränderten Stressantworten in Verbindung gebracht, wodurch RARS ein relevantes Gen für die Untersuchung von Mechanismen ist, die die Kontrolle der Translation mit Zellviabilität und Differenzierung verknüpfen. RARS wird außerdem im Kontext krankheitsassoziierter Varianten untersucht, die die Beladung von tRNA und nachgelagerte Effekte auf die Qualität des Proteoms beeinflussen.

Das ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RARS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RARS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RARS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ArgRS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RARS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ArgRS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RARS-Exone abzielen, die für die ArgRS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RARS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ArgRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RARS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ArgRS HDR-Plasmid (h) und ArgRS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RARS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RARS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.