ArgRS Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409431

Descripción general

RARS codifica la arginil‑ARNt sintetasa humana (ArgRS), una aminoacil‑ARNt sintetasa citosólica que une arginina a su ARNt correspondiente para garantizar la fidelidad de la traducción y una síntesis proteica eficiente. ArgRS participa en vías centrales del metabolismo del ARN y de la traducción, y puede interactuar funcionalmente con complejos multisintetasa que coordinan la biosíntesis de proteínas con programas celulares de estrés y señalización. La alteración de la actividad de las aminoacil‑ARNt sintetasas se ha asociado con desequilibrios en la proteostasis y con respuestas al estrés modificadas, lo que convierte a RARS en un gen relevante para investigar mecanismos que conectan el control de la traducción con la viabilidad y la diferenciación celular. RARS también se estudia en el contexto de variantes asociadas a enfermedades que afectan la carga del ARNt y sus efectos posteriores sobre la calidad del proteoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ArgRS (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RARS en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RARS junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RARS tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ArgRS.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RARS para la investigación de la señalización de ArgRS, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RARS críticos para la función de ArgRS
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RARS para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ArgRS CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ArgRS CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RARS. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ArgRS (h) y el plásmido HDR ArgRS (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RARS para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RARS definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.