Plásmido CRISPR de Activación (m) ARA70: sc-424185-ACT

El gen Ncoa4 de ratón codifica ARA70, un coactivador de receptores nucleares que modula programas de transcripción al actuar como puente entre receptores activados por ligando, la cromatina y la maquinaria basal de transcripción. ARA70 influye en la expresión génica sensible a hormonas, incluidas rutas vinculadas a la señalización del receptor de andrógenos y procesos metabólicos y de diferenciación más amplios dependientes de receptores nucleares. NCOA4 también está implicado en la homeostasis del hierro a través de funciones asociadas al recambio de la ferritina, conectando la regulación transcripcional con las respuestas celulares al estrés. La actividad desregulada de NCOA4/ARA70 se ha estudiado en contextos de señalización endocrina alterada, control de la proliferación y fenotipos asociados al metabolismo del hierro relevantes para la biología de la enfermedad.

ARA70 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ncoa4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARA70 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ncoa4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ncoa4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARA70. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ncoa4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARA70 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARA70 en células tumorales con expresión de Ncoa4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.