Plásmido Doble Nickase (h) Aquaporin 9/AQP9: sc-401298-NIC

AQP9 codifica la acuaporina-9, un canal de membrana plasmática que facilita el flujo transmembrana de agua y pequeños solutos neutros, incluido el glicerol y otros polioles, vinculando así el equilibrio osmótico con el metabolismo intermediario. En hepatocitos y células inmunitarias, AQP9 contribuye a la captación de glicerol y al manejo del carbono, lo que puede influir en procesos gluconeogénicos y del metabolismo lipídico, además de participar en la regulación del volumen celular. Su expresión está regulada por señales inflamatorias y metabólicas, conectando a AQP9 con vías que gobiernan el transporte de nutrientes, las respuestas al estrés y las transiciones de estado celular. Se han descrito niveles desregulados de AQP9 en contextos de disfunción metabólica y en la biología de enfermedades inflamatorias, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del transporte de membrana y de la reprogramación metabólica.

Aquaporin 9/AQP9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AQP9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AQP9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AQP9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AQP9 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.