Aquaporin 5/AQP5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419176

Descripción general

Aqp5 codifica la aquaporina 5 (AQP5), un canal de agua de membrana que facilita el movimiento rápido y osmótico de agua a través de barreras epiteliales en tejidos secretorios como las glándulas salivales y lagrimales, así como en las vías respiratorias. Al regular el transporte de fluidos transepitelial y contribuir a la homeostasis del volumen celular epitelial, AQP5 influye en procesos como la hidratación de la superficie de las vías respiratorias, la secreción glandular y la función de barrera. La expresión o localización alteradas de AQP5 se han vinculado con un manejo desregulado de los fluidos y con la remodelación epitelial en enfermedades inflamatorias de las vías respiratorias, disfunción de glándulas exocrinas y respuestas tisulares asociadas al edema. En sistemas murinos, Aqp5 se estudia con frecuencia en el contexto de la diferenciación epitelial, el acoplamiento del transporte de iones y agua, y la señalización sensible al estrés que configura la fisiología mucosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aqp5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aqp5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aqp5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aquaporin 5/AQP5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aqp5 para la investigación de la señalización de Aquaporin 5/AQP5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aqp5 críticos para la función de Aquaporin 5/AQP5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aqp5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aqp5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aquaporin 5/AQP5 (m) y el plásmido HDR Aquaporin 5/AQP5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aqp5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aqp5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.