apoH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419168

Panoramica

Apoh codifica l’apolipoproteina H (apoH; β2-glicoproteina I), una glicoproteina circolante che lega i fosfolipidi e che si associa a membrane anioniche e a particelle lipoproteiche. Nel topo, apoH partecipa ai processi di trasporto e rimozione dei lipidi e interagisce con vie legate alla coagulazione e al complemento attraverso le sue interazioni con fosfolipidi a carica negativa esposti durante l’attivazione o il danno cellulare. Alterazioni della biologia di APOH/apoH sono associate a un’emostasi deregolata e a processi vascolari infiammatori, e la proteina è frequentemente studiata nel contesto del riconoscimento dei fosfolipidi mediato da autoanticorpi. Queste funzioni rendono Apoh un bersaglio utile per studiare il crosstalk tra lipidi e sistema immunitario, la biologia delle proteine che legano le membrane e i meccanismi che collegano l’infiammazione a fenotipi correlati alla trombosi nei modelli sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoH (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apoh in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apoh insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apoh a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apoh per lo studio della segnalazione di apoH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apoh critici per la funzione di apoH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apoh per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apoh. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoH Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoH (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apoh per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apoh definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.