Plasmide Double Nickase (h) Annexin VI: sc-401791-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Annexin VI correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Annexin VI Double Nickase (h) et le plasmide Annexin VI Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ANXA6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Annexin VI Antibody (E-5): sc-271859
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Annexin VI | sc-401791-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Annexin VI | sc-401791-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ANXA6 humain code l’annexine VI, une protéine d’échafaudage se liant aux phospholipides de manière dépendante du Ca2+, qui s’associe au feuillet interne des membranes cellulaires afin de coordonner le trafic membranaire, l’exocytose/l’endocytose et la dynamique du cytosquelette. L’annexine VI participe à la signalisation calcique et à l’organisation des microdomaines membranaires, influençant le renouvellement des récepteurs et les voies de transduction du signal dépendant d’un transport vésiculaire régulé. Elle a été impliquée dans des processus tels que l’homéostasie du cholestérol et la migration cellulaire, via ses rôles dans le tri endosomal et le couplage membrane–cytosquelette. Des altérations de l’expression ou de la localisation d’ANXA6 ont été rapportées dans divers contextes, notamment en biologie du cancer et dans des phénotypes cellulaires liés au cardiovasculaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation dépendants des membranes.
Annexin VI Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ANXA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ANXA6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ANXA6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ANXA6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.