Plásmido Doble Nickase (h) Ankyrin G: sc-400421-NIC

ANK3 codifica la anquirina G, una proteína adaptadora de membrana que conecta diversos canales iónicos y moléculas de adhesión celular con el citoesqueleto de espectrina–actina, organizando dominios de membrana especializados como el segmento inicial del axón y los nodos de Ranvier. Mediante la regulación del agrupamiento y el andamiaje de canales en membranas excitables, la anquirina G influye en la polaridad neuronal, el inicio del potencial de acción y la estabilidad sináptica, y también contribuye a la integridad de las uniones célula–célula en epitelios. Las alteraciones asociadas a ANK3 se han vinculado con la genética de enfermedades neuropsiquiátricas y con cambios en la función de redes neuronales, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de excitabilidad, desarrollo de circuitos y organización del citoesqueleto. Estas propiedades hacen de ANK3 un objetivo relevante para desentrañar las vías que gobiernan el tráfico de proteínas de membrana, el anclaje citoesquelético y la señalización celular en compartimentos subcelulares especializados.

Ankyrin G El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ANK3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ANK3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ANK3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ANK3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.