Amelogenin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403337-ACT

AMELYはアメロゲニン（amelogenin）をコードしており、歯の発生（歯胚形成）過程におけるエナメル質マトリックスの組織化に寄与する、分泌性の細胞外マトリックスタンパク質である。アメロゲニンは、ハイドロキシアパタイト結晶の成長調節およびマトリックスのリモデリングを通じてエナメル質の石灰化を支える。さらに、エナメル質形成を形作る、厳密に協調した上皮―間葉相互作用やプロテアーゼ駆動のプロセシング過程にも関与し、AMELYの発現は鉱質化組織の発生プログラムと結び付いている。アメロゲニン関連経路の変動はエナメル質の構造的完全性に関係し、またAMELX/AMELYの配列差が法医学・人類学のワークフローにおける性判別マーカーとして有用であることから、ヒト遺伝学でもしばしば活用されている。生物医学研究においては、AMELYはマトリックス遺伝子の転写制御、分化状態、ならびにバイオミネラリゼーション関連の遺伝子ネットワークを研究するための扱いやすいモデルとして用いられる。

Amelogenin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AMELYの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Amelogenin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AMELY 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAMELY転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Amelogeninの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAMELY遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAmelogenin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAMELY発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAmelogenin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。