Alox12e Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419087
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Alox12e O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Alox12e, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Alox12e Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419087 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Alox12e codifica a 12-lipoxigenase do araquidonato, do tipo 12R, uma dioxigenase de ferro não heme que catalisa a oxigenação de ácidos graxos poli-insaturados para gerar mediadores lipídicos bioativos. Na epiderme de camundongos, Alox12e atua na via das lipoxigenases e coopera com enzimas relacionadas no processamento oxidativo de lipídios, o que sustenta a diferenciação de queratinócitos e a formação da barreira do estrato córneo. Por meio da regulação de produtos de oxidação lipídica e da sinalização a jusante, Alox12e contribui para a homeostase da barreira, respostas inflamatórias e sinalização de estresse na pele. A desregulação desse eixo é relevante para estudos de defeitos de barreira semelhantes aos da ictiose, inflamação associada à dermatite e fenótipos mais amplos de metabolismo lipídico na biologia epitelial.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Alox12e (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Alox12e em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Alox12e, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Alox12e na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Alox12e.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Alox12e para a investigação da sinalização de Alox12e, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Alox12e críticos para a função Alox12e
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Alox12e para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Alox12e Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Alox12e Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Alox12e. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Alox12e Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Alox12e (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Alox12e para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Alox12e definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.