Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406757

Descripción general

ALDH5A1 codifica la deshidrogenasa de semialdehído succínico (SSADH), una enzima mitocondrial dependiente de NAD+ que cataliza la oxidación del semialdehído succínico a succinato, conectando el catabolismo del GABA con el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). Al controlar el flujo a través del desvío del GABA (GABA shunt), ALDH5A1 ayuda a regular el equilibrio redox celular, el metabolismo mitocondrial y el recambio de neurotransmisores en tejidos neuronales. La alteración de la actividad de SSADH se asocia con la acumulación de metabolitos derivados del GABA y con cambios en la señalización inhibitoria, y ALDH5A1 se ha estudiado en el contexto de errores congénitos del metabolismo que afectan al sistema nervioso. Estas características hacen de ALDH5A1 una diana útil para investigar la comunicación metabólica entre la función mitocondrial y las vías de neurotransmisores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALDH5A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALDH5A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALDH5A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALDH5A1 para la investigación de la señalización de Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALDH5A1 críticos para la función de Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALDH5A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALDH5A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h) y el plásmido HDR Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALDH5A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALDH5A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.