Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419078

Descripción general

Aldh1a1 codifica la aldehído deshidrogenasa 1-A1 (ALDH1A1), una enzima citosólica dependiente de NAD(P)+ que oxida una amplia gama de aldehídos endógenos y xenobióticos a sus correspondientes ácidos carboxílicos, contribuyendo así a la desintoxicación celular y a la homeostasis redox. En tejidos de ratón, ALDH1A1 participa en el metabolismo de los retinoides al catalizar la conversión de retinaldehído a ácido retinoico, vinculando este gen con programas transcripcionales que influyen en la diferenciación, el metabolismo y las respuestas al estrés oxidativo. La actividad de ALDH1A1 se intersecta con las vías de peroxidación lipídica y de eliminación de aldehídos reactivos, ayudando a limitar el estrés carbonílico y la formación posterior de aductos en proteínas y ADN. La expresión o función alteradas de ALDH1A1 se han asociado con fenotipos relacionados con el estrés oxidativo y se estudia con frecuencia en contextos como la desregulación metabólica, la neurobiología y la biología de células tumorales, como marcador del estado celular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Aldh1a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Aldh1a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Aldh1a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Aldh1a1 para la investigación de la señalización de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Aldh1a1 críticos para la función de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Aldh1a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Aldh1a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m) y el plásmido HDR Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Aldh1a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Aldh1a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.