Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
AKAP 79 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402647
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AKAP 79 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AKAP 79, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AKAP 79 Anticuerpo (D-9): sc-17772
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AKAP 79 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402647 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
AKAP5 codifica AKAP 79, una proteína de anclaje de la quinasa A asociada a membrana que organiza complejos de señalización multiproteicos al fijar la PKA, junto con fosfatasas como la calcineurina y la PP2B, en microdominios subcelulares definidos. Al actuar como andamio para quinasas, fosfatasas y receptores, AKAP 79 modula la amplitud y la duración de la señal en vías que controlan la plasticidad sináptica, el tráfico de receptores y la fosforilación dependiente de la actividad, incluidas funciones reguladas por calcio y AMPc. En neuronas y tejidos excitables, esta regulación espacial influye en la modulación de canales iónicos y en las respuestas transcripcionales posteriores. La desregulación de la señalización de AKAP 79 se ha relacionado con cambios en la excitabilidad neuronal y en el funcionamiento de redes, lo que convierte a AKAP5 en un nodo útil para estudiar mecanismos relevantes para la biología de enfermedades neurológicas y la señalización sensible al estrés.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AKAP 79 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AKAP5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AKAP5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AKAP5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AKAP 79.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AKAP5 para la investigación de la señalización de AKAP 79, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de AKAP5 críticos para la función de AKAP 79
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AKAP5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AKAP 79 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AKAP 79 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AKAP5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AKAP 79 (h) y el plásmido HDR AKAP 79 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AKAP5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AKAP5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.