AKAP 79 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402647

Panoramica

AKAP5 codifica AKAP 79, una proteina di ancoraggio della chinasi A associata alla membrana che organizza complessi di segnalazione multiproteici, ancorando la PKA insieme a fosfatasi come la calcineurina e la PP2B in microdomini subcellulari definiti. Agendo da impalcatura per chinasi, fosfatasi e recettori, AKAP 79 modula l’ampiezza e la durata del segnale in vie che controllano la plasticità sinaptica, il traffico dei recettori e la fosforilazione dipendente dall’attività, inclusi processi regolati da calcio e cAMP. Nei neuroni e nei tessuti eccitabili, questa regolazione spaziale influenza la modulazione dei canali ionici e le risposte trascrizionali a valle. Un’alterata segnalazione mediata da AKAP 79 è stata implicata in cambiamenti dell’eccitabilità neuronale e della funzione di rete, rendendo AKAP5 un nodo utile per studiare meccanismi pertinenti alla biologia delle malattie neurologiche e alla segnalazione responsiva allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 79 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AKAP5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AKAP5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AKAP5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AKAP 79.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AKAP5 per lo studio della segnalazione di AKAP 79, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AKAP5 critici per la funzione di AKAP 79
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AKAP5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AKAP 79 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AKAP 79 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AKAP5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AKAP 79 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AKAP 79 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AKAP5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AKAP5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.