AKAP 220 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405585-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- AKAP 220O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase AKAP 220 (h) e o Plasmídeo Double Nickase AKAP 220 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para AKAP11. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
AKAP 220 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405585-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AKAP 220 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405585-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O gene humano AKAP11 codifica a proteína de ancoragem da A-quinase 220 (AKAP 220), um andaime que organiza espacialmente a PKA juntamente com outras enzimas de sinalização para moldar respostas de AMPc compartimentalizadas. Ao prender a atividade quinase a domínios subcelulares definidos, a AKAP 220 contribui para o controlo, dependente de fosforilação, da progressão do ciclo celular, da dinâmica do citoesqueleto e da integração de sinais mediados por recetores. A desregulação de microdomínios de sinalização mediados por AKAP11 tem sido associada a programas alterados de proliferação e resposta ao stress em contextos relevantes para doenças, sustentando o seu uso como um nó mecanístico em vias que ligam a sinalização por segundos mensageiros a alterações do estado celular. Por isso, a AKAP11 é frequentemente investigada para compreender como a reorganização da ancoragem da PKA influencia os resultados transcricionais a jusante e as redes de proteostase em células humanas.
AKAP 220 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AKAP11 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AKAP11. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AKAP11. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AKAP11 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.