Plasmide Double Nickase (h) AK2: sc-404166-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AK2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AK2 Double Nickase (h) et le plasmide AK2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AK2 Antibody (F-2): sc-374095
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AK2 | sc-404166-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AK2 | sc-404166-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adénylate kinase 2 (AK2) est une phosphotransférase située dans l’espace intermembranaire mitochondrial qui catalyse le transfert réversible de groupements phosphate entre nucléotides adénine, contribuant au maintien de l’homéostasie ATP/ADP/AMP et aux échanges énergétiques mitochondriaux. En tamponnant les pools de nucléotides adénine, AK2 participe au métabolisme couplé à la phosphorylation oxydative, à la dynamique de la signalisation apoptotique et à des processus dépendants des nucléotides qui influencent la prolifération cellulaire et les réponses au stress. Une altération de la fonction d’AK2 a été associée à des défauts du développement des cellules hématopoïétiques et immunitaires ainsi qu’à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la régulation métabolique, de l’apoptose et du contrôle du destin cellulaire. Dans les systèmes humains, AK2 est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie mitochondriale, du stress bioénergétique et des mécanismes reliant l’équilibre énergétique aux dysfonctionnements cellulaires associés aux maladies.
AK2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.