AIM2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403391-ACT

Absent in melanoma 2 (AIM2) codifica un recettore citosolico di riconoscimento dei pattern che rileva il DNA a doppio filamento e assembla l’inflammasoma AIM2, promuovendo l’attivazione della caspasi‑1 dipendente da ASC con conseguente maturazione di IL‑1β e IL‑18 e induzione della morte cellulare piroptotica. La segnalazione mediata da AIM2 interseca le reti di rilevamento dell’immunità innata e i programmi trascrizionali infiammatori, modellando le risposte antimicrobiche e l’infiammazione sterile. Un’attività di AIM2 deregolata è stata implicata nella fisiopatologia infiammatoria e autoimmune, nonché nell’infiammazione associata ai tumori, rendendolo un nodo utile per studiare l’immunità innata innescata dal DNA e il processamento delle citochine nelle cellule umane.

AIM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AIM2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

AIM2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AIM2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AIM2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di AIM2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AIM2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da AIM2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via AIM2 nelle cellule tumorali con espressione di AIM2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.