Plásmido CRISPR de Activación (h) ADRP: sc-400802-ACT

PLIN2 codifica la proteína relacionada con la diferenciación del tejido adiposo (ADRP), una perilipina asociada a las gotas lipídicas que recubre los depósitos de lípidos neutros y regula su estabilidad, su recambio y el acceso de las lipasas. ADRP ayuda a coordinar el manejo intracelular de triglicéridos y ésteres de colesterol, vinculando la biogénesis de las gotas lipídicas con el equilibrio energético celular, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización metabólica. La alteración de la expresión de PLIN2 se asocia con fenotipos de acumulación de lípidos observados en la disfunción metabólica y en estados inflamatorios, y se estudia con frecuencia en contextos de esteatosis hepática, formación de células espumosas ateroscleróticas y metabolismo lipídico tumoral. Como indicador de la dinámica del almacenamiento lipídico, ADRP se utiliza ampliamente para investigar vías que controlan la captación de ácidos grasos, la esterificación y la lipofagia.

ADRP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLIN2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADRP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLIN2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLIN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADRP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLIN2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADRP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADRP en células tumorales con expresión de PLIN2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.