ADAMTS-8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405463-ACT

ADAMTS8 は、ADAMTS ファミリーに属する分泌型の亜鉛依存性メタロプロテアーゼをコードしており、プロテオグリカンおよび関連基質を切断することで細胞外マトリックス（ECM）を再構築します。ADAMTS-8 の活性は、間質および血管の微小環境における ECM–受容体相互作用や、プロテアーゼによるマトリックスのターンオーバーと結びつきつつ、組織構築、細胞遊走、局所シグナル伝達の制御に寄与します。発現の異常は、炎症、血管リモデリング、腫瘍関連微小環境の変化といった状況で報告されており、マトリックス組成の変化が血管新生や浸潤能といった表現型に影響し得ます。そのため、ADAMTS8 は疾患関連モデルにおいて、細胞外でのタンパク質分解やマトリックス媒介性シグナル伝達を調節する因子として、しばしば研究対象となっています。

ADAMTS-8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ADAMTS8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ADAMTS-8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ADAMTS8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はADAMTS8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ADAMTS-8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のADAMTS8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるADAMTS-8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびADAMTS8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるADAMTS-8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。