Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAMDEC1: sc-405515-ACT

ADAMDEC1 codifica una metaloproteasa secretada de la familia ADAM (una desintegrina y metaloproteasa) que contribuye a la remodelación de la matriz extracelular y a la regulación de la proteólisis pericelular. Se asocia predominantemente con compartimentos inmunitarios mieloides y mucosos, donde se ha vinculado con la señalización inflamatoria, la diferenciación de leucocitos y los procesos de vigilancia tisular. Mediante la modulación del entorno extracelular, ADAMDEC1 puede influir en la migración celular, la dinámica de adhesión y las vías sensibles a citocinas que configuran las respuestas inmunitarias locales. Se han descrito alteraciones en la expresión de ADAMDEC1 en estudios sobre inflamación gastrointestinal, biología del microambiente tumoral e infiltración inmunitaria, lo que respalda su utilidad como lectura molecular en investigación en inmunología y cáncer.

ADAMDEC1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAMDEC1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAMDEC1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAMDEC1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAMDEC1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAMDEC1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAMDEC1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAMDEC1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAMDEC1 en células tumorales con expresión de ADAMDEC1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.