ADAM8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418993

Descripción general

Adam8 codifica una metaloproteasa-disintegrina transmembrana (ADAM8) que media el desprendimiento del ectodominio y las interacciones célula–célula o célula–matriz, integrando la proteólisis con la señalización de adhesión. En los compartimentos inmunitarios y estromales del ratón, ADAM8 contribuye a la señalización inflamatoria, el reclutamiento de leucocitos y la remodelación tisular mediante la regulación de receptores de superficie y de la disponibilidad de citocinas/quimiocinas. Su actividad se cruza con vías vinculadas a las salidas de señalización de MAPK y NF-κB al modular la activación de receptores y las señales del microambiente extracelular. La expresión desregulada de Adam8 se ha asociado con inflamación crónica, fibrosis y procesos relacionados con tumores, como la invasión y la remodelación del nicho metastásico, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos en modelos de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADAM8 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adam8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adam8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adam8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADAM8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adam8 para la investigación de la señalización de ADAM8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adam8 críticos para la función de ADAM8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adam8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ADAM8 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ADAM8 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adam8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADAM8 (m) y el plásmido HDR ADAM8 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adam8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adam8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.