Plásmido CRISPR de Activación (h) ADAM23: sc-403703-ACT

ADAM23 codifica una proteína con dominio desintegrina y metaloproteasa que funciona principalmente como una molécula de adhesión y señalización en la superficie celular catalíticamente inactiva. En tejidos humanos, ADAM23 participa en interacciones célula–célula y célula–matriz y se ha relacionado con la regulación del desarrollo neuronal, la organización sináptica y la migración celular mediante interacciones con ligandos extracelulares y vías asociadas a integrinas. Se han descrito alteraciones en la expresión de ADAM23 y en su regulación epigenética en múltiples contextos patológicos, incluidos trastornos neurológicos y cáncer, donde son relevantes los cambios en la señalización de adhesión y el comportamiento invasivo. Como regulador asociado a la membrana de la comunicación intercelular, ADAM23 ofrece una herramienta útil para analizar cómo las señales extracelulares moldean los programas de señalización intracelular.

ADAM23 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADAM23 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ADAM23 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADAM23 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADAM23, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ADAM23. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADAM23 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ADAM23 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ADAM23 en células tumorales con expresión de ADAM23 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.