Plásmido Doble Nickase (h) ACTG1: sc-400006-NIC

ACTG1 codifica la actina gamma 1 citoplasmática, un componente central del citoesqueleto de actina que sostiene la forma celular, la tensión cortical y la generación de fuerza. ACTG1 participa en la polimerización y remodelación de los filamentos de actina que sustentan procesos como la migración celular, la adhesión, la citocinesis y la mecanotransducción, integrándose con la señalización de las GTPasas de la familia Rho y con redes de proteínas de unión a actina. En biología humana, la perturbación de la dinámica del citoesqueleto dependiente de ACTG1 puede alterar el tráfico intracelular y la arquitectura celular, lo que la hace relevante para estudios del desarrollo tisular y de las respuestas al estrés. La variación genética o la desregulación que afecta a ACTG1 se ha asociado con fenotipos vinculados al citoesqueleto, incluidas formas de hipoacusia neurosensorial y trastornos que implican alteraciones en la motilidad y la estructura celulares.

ACTG1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACTG1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACTG1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACTG1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACTG1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.