ACTG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400006

Descripción general

ACTG1 codifica la gamma-actina citoplasmática, una isoforma de actina altamente conservada que polimeriza en microfilamentos para sostener la forma celular, la tensión cortical y la estabilidad mecánica. La dinámica de la actina impulsada por ACTG1 coordina procesos clave como la migración celular, la citocinesis, el tráfico de membranas y la formación de uniones adherentes, integrándose con vías reguladoras de la actina como la señalización de GTPasas de la familia Rho y redes de proteínas de unión a actina. En biología humana, las alteraciones en la función de ACTG1 y en la homeostasis del citoesqueleto de actina se asocian con defectos en sistemas sensoriales y del desarrollo, y se estudian con frecuencia en el contexto de la remodelación del citoesqueleto durante respuestas al estrés y la morfogénesis tisular. Dado que la arquitectura de la actina influye en programas transcripcionales y en la mecanotransducción, ACTG1 también es relevante para investigaciones sobre transiciones de estado celular y señalización dependiente del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTG1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACTG1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACTG1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACTG1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTG1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACTG1 para la investigación de la señalización de ACTG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACTG1 críticos para la función de ACTG1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACTG1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTG1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ACTG1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACTG1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTG1 (h) y el plásmido HDR ACTG1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACTG1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACTG1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.