Plásmido Doble Nickase (h) ACOX1: sc-401690-NIC

ACOX1 codifica la acil-CoA oxidasa 1, la enzima peroxisomal limitante de la velocidad que cataliza el primer paso de la β-oxidación de ácidos grasos de cadena muy larga y genera peróxido de hidrógeno como subproducto. A través de su función en el catabolismo lipídico peroxisomal, ACOX1 ayuda a mantener la homeostasis lipídica celular y se vincula con la regulación redox y las vías de señalización metabólica. La alteración de la actividad de ACOX1 se ha asociado con fenotipos de disfunción peroxisomal, incluida la acumulación de ácidos grasos de cadena muy larga y efectos secundarios sobre el metabolismo mitocondrial. La desregulación de la β-oxidación peroxisomal y de las vías de estrés oxidativo que involucran a ACOX1 es relevante para estudios de neurodesarrollo, metabolismo hepático y respuestas inflamatorias.

ACOX1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACOX1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACOX1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACOX1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACOX1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.