ACE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400759

Descripción general

La enzima convertidora de angiotensina (ECA) es una dipeptidil carboxipeptidasa dependiente de zinc que cataliza la conversión de angiotensina I en el péptido vasoactivo angiotensina II y degrada la bradicinina, lo que la sitúa como un regulador central del sistema renina–angiotensina. Mediante la modulación de la señalización de angiotensina II/AT1R, la ECA influye en el tono vasomotor, el equilibrio de sodio y líquidos, el estrés oxidativo y programas inflamatorios que convergen con respuestas vinculadas a MAPK y NF-κB en tejidos vasculares y renales. La actividad de la ECA contribuye a la función endotelial y a la homeostasis de péptidos extracelulares, y la expresión alterada de la ECA o sus variantes se estudian con frecuencia en la biología de las enfermedades cardiovasculares y renales. Estas funciones hacen de la ECA un nodo útil para investigar la regulación de la presión arterial, la remodelación vascular y la remodelación tisular asociada a la inflamación en modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACE para la investigación de la señalización de ACE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACE críticos para la función de ACE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ACE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACE (h) y el plásmido HDR ACE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.