Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADVL (VLCAD) (m): sc-418939

Présentation

Acadvl code la très longue chaîne acyl‑CoA déshydrogénase (ACADVL/VLCAD), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse la première étape de déshydrogénation de la β‑oxydation des acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne. Cette activité fournit des équivalents réducteurs au système de flavoprotéine de transfert d’électrons et soutient la production d’énergie oxydative, en particulier dans les tissus à forte demande mitochondriale tels que le cœur, le muscle squelettique et le foie. Une perturbation d’ACADVL altère le catabolisme lipidique, favorisant l’accumulation d’acylcarnitines à longue chaîne et orientant le métabolisme cellulaire vers une utilisation compensatoire du glucose et des réponses au stress. En tant qu’enzyme clé de l’oxydation des acides gras et de l’homéostasie mitochondriale, Acadvl est largement étudié dans des modèles d’inflexibilité métabolique, de dysfonction mitochondriale et de toxicité cellulaire induite par les lipides, pertinents pour la recherche sur les erreurs innées du métabolisme.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACADVL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acadvl dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acadvl, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acadvl à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACADVL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acadvl pour l'étude de la signalisation de ACADVL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acadvl essentiels à la fonction de ACADVL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acadvl pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACADVL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACADVL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acadvl. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACADVL plasmide HDR (m) et le ACADVL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acadvl pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acadvl définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.