Plasmide CRISPR d'Activation (h) ACADVL (VLCAD): sc-403111-ACT

ACADVL code l’acyl-CoA déshydrogénase des acides gras à très longue chaîne (VLCAD), une flavoprotéine mitochondriale qui catalyse l’étape initiale de déshydrogénation de la β‑oxydation des acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne. L’activité de VLCAD soutient l’homéostasie énergétique cellulaire en couplant le catabolisme des acides gras au transfert d’électrons via ETF/ETFDH et à la phosphorylation oxydative en aval, en particulier dans les tissus à forte demande énergétique comme le cœur et le muscle squelettique. Une expression ou une fonction altérée d’ACADVL perturbe l’oxydation mitochondriale des acides gras, favorise l’accumulation d’acylcarnitines à longue chaîne et compromet la flexibilité métabolique en situation de jeûne ou lors d’une demande énergétique accrue. En conséquence, ACADVL est largement étudié dans le cadre des troubles héréditaires de l’oxydation des acides gras et, plus largement, des dysfonctions métaboliques mitochondriales associées à des phénotypes cardiométaboliques et myopathiques.

ACADVL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACADVL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ACADVL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACADVL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACADVL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ACADVL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACADVL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ACADVL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ACADVL dans les cellules tumorales présentant une expression de ACADVL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.