ACAD-9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432841

Panoramica

Acad9 codifica per il membro 9 della famiglia delle acil-CoA deidrogenasi (ACAD-9), una flavoproteina mitocondriale che supporta la β-ossidazione degli acidi grassi ed è necessaria per un assemblaggio efficiente del complesso I della fosforilazione ossidativa. Attraverso i suoi ruoli nel trasferimento elettronico mitocondriale e nel metabolismo energetico, ACAD-9 influenza l’omeostasi redox, la produzione di ATP e la flessibilità metabolica nei tessuti ad alta richiesta energetica. L’alterazione della funzione di ACAD9 è associata a difetti di assemblaggio del complesso I e a fenotipi simili all’encefalomiopatia mitocondriale, rendendolo rilevante per lo studio del fallimento bioenergetico, delle risposte allo stress metabolico e dei meccanismi delle malattie mitocondriali in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACAD-9 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acad9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acad9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acad9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACAD-9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acad9 per lo studio della segnalazione di ACAD-9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acad9 critici per la funzione di ACAD-9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acad9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACAD-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ACAD-9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acad9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACAD-9 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ACAD-9 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acad9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acad9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.