ABP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410674-ACT

ヒトAOC1は、アミン酸化酵素銅含有1（amine oxidase copper-containing 1、ABP1/DAOとも呼ばれる）をコードしており、分泌型かつ膜関連型の酵素として、ヒスタミンやプトレシンなどの生体アミンの酸化的脱アミノ化を触媒し、アルデヒド、アンモニア、過酸化水素を産生します。細胞外アミン濃度（アミントーン）の調節および活性酸素種（ROS）産生の制御を通じて、AOC1は炎症シグナル伝達、上皮バリアの生物学、ならびに組織微小環境におけるレドックス感受性経路に影響を与えます。AOC1の活性や発現の変化は、ヒスタミン代謝および免疫応答の破綻と関連づけられており、アレルギー関連炎症、消化管粘膜機能、腫瘍関連ストローマの生物学などの文脈で研究されています。これらの特性により、AOC1はアミン分解代謝、酸化ストレス、ならびに細胞外代謝物によって媒介される細胞間シグナル伝達の機構研究に有用な標的となります。

ABP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AOC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ABP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AOC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAOC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ABP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAOC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるABP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAOC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるABP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。