Partículas Lentivirales de Activación (m) A20/TNFAIP3: sc-423436-LAC

Tnfaip3 codifica A20/TNFAIP3, una enzima de edición de ubiquitina que finaliza la señalización inflamatoria al restringir la activación de las vías de NF-κB y MAPK aguas abajo de las señales procedentes del receptor de TNF, los receptores tipo Toll y el receptor de IL-1. Mediante actividades coordinadas de desubiquitinación y de ligasa de ubiquitina, A20 modula andamiajes de ubiquitina enlazados a K63 y M1 en adaptadores clave como RIPK1, TRAF6 y NEMO para controlar la producción de citocinas y la señalización de muerte celular. En sistemas murinos, la actividad alterada de A20 perturba la homeostasis inmunitaria innata y adaptativa, influyendo en las respuestas de los compartimentos mieloide y linfoide y moldeando la inflamación tisular. Estas funciones hacen de Tnfaip3 un nodo comúnmente estudiado en biología de la inflamación, mecanismos asociados a la autoinmunidad y contextos de señalización oncogénica en los que la regulación de NF-κB es central.

Las partículas de activación lentiviral A20/TNFAIP3 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Tnfaip3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral A20/TNFAIP3 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Tnfaip3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de A20/TNFAIP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Tnfaip3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.