Particules Lentivirales d'Activation (h) A20/TNFAIP3: sc-400447-LAC

TNFAIP3 code A20, une enzyme d’édition de l’ubiquitine à doigts de zinc qui agit comme un régulateur négatif central de la signalisation inflammatoire. A20 met fin à l’activation de NF-κB en aval des voies du récepteur du TNF, des récepteurs de type Toll et du récepteur de l’IL-1, en modulant les chaînes d’ubiquitine liées en K63 et en M1 et en favorisant la dégradation protéasomale de protéines adaptatrices clés. Par ces actions, A20 limite la production de cytokines, les signaux de survie cellulaire et l’activation de l’immunité innée, contribuant au maintien de l’homéostasie tissulaire. Une expression ou une fonction dérégulée de TNFAIP3 est associée à des réponses immunitaires aberrantes et a été impliquée dans les mécanismes des maladies auto-immunes et inflammatoires, ainsi que dans des dépendances de signalisation au sein de certaines tumeurs.

Les particules d'activation lentivirales A20/TNFAIP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TNFAIP3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales A20/TNFAIP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TNFAIP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de A20/TNFAIP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TNFAIP3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.