Particules Lentivirales d'Activation (h) 20S Proteasome α7: sc-401897-LAC

PSMA7 code pour la sous-unité α7 du protéasome 20S, un composant structural essentiel de la particule centrale 20S qui contribue à l’assemblage du protéasome et à la formation du canal d’entrée à ouverture contrôlée, régulant l’accès des substrats. Via le système ubiquitine–protéasome, α7 soutient le renouvellement des protéines dépendant de l’ATP, qui régule la progression du cycle cellulaire, la transduction du signal, le traitement des antigènes pour la présentation par le CMH de classe I, ainsi que la protéostasie en conditions de stress oxydatif ou protéotoxique. Des perturbations de la composition ou de l’activité du protéasome peuvent remodeler la dégradation de protéines régulatrices clés et influencer des voies telles que la signalisation NF-κB, les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose. Une homéostasie du protéasome altérée, notamment des variations d’expression de PSMA7, a été rapportée dans de multiples contextes pertinents pour la maladie où la protéostasie et la surveillance immunitaire sont déréglées, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans les études de biologie du protéasome.

Les particules d'activation lentivirales 20S Proteasome α7 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PSMA7 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales 20S Proteasome α7 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PSMA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de 20S Proteasome α7. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PSMA7 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.