Partículas Lentivirales de Activación (h) 20S Proteasome α7: sc-401897-LAC

PSMA7 codifica la subunidad α7 del proteasoma 20S, un componente estructural esencial de la partícula central 20S que contribuye al ensamblaje del proteasoma y a la formación del canal de entrada con compuerta que controla el acceso de los sustratos. A través del sistema ubiquitina–proteasoma, α7 sostiene el recambio proteico dependiente de ATP que regula la progresión del ciclo celular, la transducción de señales, el procesamiento de antígenos para su presentación por MHC de clase I y la proteostasis bajo estrés oxidativo o proteotóxico. Las alteraciones en la composición o la actividad del proteasoma pueden remodelar la degradación de proteínas reguladoras clave e influir en vías como la señalización de NF-κB, las respuestas al daño del ADN y la apoptosis. Se ha informado de una homeostasis del proteasoma alterada, incluidos cambios en la expresión de PSMA7, en múltiples contextos relevantes para enfermedades en los que la proteostasis y la vigilancia inmunitaria están desreguladas, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de biología del proteasoma.

Las partículas de activación lentiviral 20S Proteasome α7 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PSMA7 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral 20S Proteasome α7 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PSMA7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de 20S Proteasome α7. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PSMA7 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.